甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达
刘洪伟1; 王帅1; 王强1; 王伟1; 杨艳芳1; 刘锡葵1; 邱德有1
2017
发表期刊食品与生物技术学报
卷号36期号:05页码:479-485
摘要本文作者研究了赤霉素合成途径中的关键酶-贝壳杉烯合酶,对其功能的研究可以为以后优化品种提供基因层面的基础。首先通过RACE-PCR技术,从甜菜树叶片中克隆得到贝壳杉烯合酶基因(Ent-kaurene synthase gene,Yl KS)的全长c DNA,共2 512 bp(Gen Bank登录号为KP872698),其ORF长度为2 232 bp,共编码743个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量大小为84 987,蛋白质等电点为5.264,表明该蛋白质呈酸性。将该基因构建到表达载体pET32a中,得到重组质粒pET-32a-Yl KS。通过将p GG/An2、p IRS和重组质粒pET-32a-Yl KS 3个质粒共转入菌株BL21(DE3)中,得到重组菌株,并进行发酵。通过SDS-PAGE分析发现,重组蛋白成功得到了表达。最后通过对发酵产物进行萃取,并使用GC-MS进行检测,确定了该基因所编码的酶确实是贝壳杉烯合酶。
关键词甜菜树 贝壳杉烯合酶 原核表达 气质联用
资助信息中国林业科学研究院林业研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(RIF2014-01);中国林业科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(CAFYBB2012042)
语种中文
文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.kib.ac.cn/handle/151853/61480
专题植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室
作者单位1.林木遗传育种国家重点实验室中国林业科学研究院林业研究所
2.四川农业大学农学院
3.中国医学科学院/中国协和医科大学药物研究所
4.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室
推荐引用方式
GB/T 7714
刘洪伟,王帅,王强,等. 甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达[J]. 食品与生物技术学报,2017,36(05):479-485.
APA 刘洪伟.,王帅.,王强.,王伟.,杨艳芳.,...&邱德有.(2017).甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达.食品与生物技术学报,36(05),479-485.
MLA 刘洪伟,et al."甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达".食品与生物技术学报 36.05(2017):479-485.
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