滑桃树茎皮共生菌宏基因组文库的筛选
付小莉
学位类型硕士
导师曾英
2012-05
学位授予单位中国科学院研究生院
学位专业生化与分子
摘要论文第一章为滑桃树茎皮共生菌宏基因组文库的杂交筛选。 宏基因组技术是近几年核酸技术的一个重要进展,它通过直接克隆环境 DNA,克服了传统的纯培养和 PCR 技术的局限,避开了微生物纯培养的障碍,是研究和利用微生物、尤其是未可培养微生物资源的有效途径 ,极大地扩展了微生物资源的利用空间,增加了获得新的生物活性物质的机会, 为新的医药产业和发现新的生物技术提供丰富的基因文库。植物内生菌(endophyte)是宏基因组研究的另一个潜在对象,是很多结构复杂活性多样的天然产物的重要来源, 在基因资源和天然产物资源发现方面有着巨大潜力。 以本实验室已有的滑桃树茎皮共生菌宏基因组文库混合粘粒为模板,用地高辛标记的生物催化酶基因:烯酮还原酶ER(enoate reductase),黄素还原酶OYE(old yellow enzyme), 短链脱氢酶SDR(short-chain dehydrogenase),中链脱氢酶MDR(medium-chain dehydrogenase)片段为探针对文库进行杂交筛选,从超过一百万个文库克隆中得到470 个阳性单克隆并提取保存其对应粘粒, 酶切分型后得到384 个不同酶型。不同酶型的粘粒测序并分析测序结果。测序得到相应的生物催化酶基因序列。 论文第二章为滑桃树茎皮共生菌宏基因组文库杂交筛选得到候选基因的克隆表达活性检测,以测序得到的四个基因284(short-chain dehydrogenase/reductase SDR) , 301(short-chain dehydrogenase/reductase SDR) , 368(oxygenase) , 401(bifunctional hydroxylase/oxidoreductase)序列设计特异引物,以相应的阳性粘粒为模板扩增目的基因并测序,高保真酶扩增目的基因,用大肠杆菌异源表达系统,将基因的全长构建到表达载体 pET32a(+)中,在表达菌BL21(DE3)中表达,得到部分可溶表达,选择相应的底物进行酶活性检测并检测到相应活性。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.kib.ac.cn/handle/151853/18690
专题昆明植物所硕博研究生毕业学位论文
推荐引用方式
GB/T 7714
付小莉. 滑桃树茎皮共生菌宏基因组文库的筛选[D]. 中国科学院研究生院,2012.
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