环吡酮胺增强免疫细胞杀伤肿瘤的活性评价

	环吡酮胺增强免疫细胞杀伤肿瘤的活性评价
	赵章寻
导师	周宏宇
学位专业	药学
关键词	自然杀伤细胞 NKG2D配体环吡酮胺肿瘤免疫
摘要	肿瘤免疫治疗是通过调动机体自身免疫系统来抗击肿瘤的治疗策略，与传统肿瘤疗法相比具有毒副作用小，特异性高，治疗效果好等优势。自然杀伤细胞（natural killer cell, NK）是机体重要的免疫细胞，也是免疫系统的第一道防线，具有抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节等功能。NKG2D（Natural-killer group 2 member D）作为NK细胞表面的激活性受体，能够通过识别并结合靶细胞表面的特异性配体介导NK细胞激活从而发挥抗肿瘤作用。经过免疫编辑的肿瘤细胞其表面NKG2D配体表达的降低或缺失将导致肿瘤细胞发生免疫逃逸从而阻碍NK细胞对其进行识别和杀伤。因此，促进肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达是增强NK细胞对肿瘤杀伤活性的有效策略。近年的研究发现，一些小分子化合物能够有效促进肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达，从而增强其免疫原性，使肿瘤细胞更容易被NK细胞识别和杀伤。本论文中，我们采用流式细胞术，基于对NKG2D配体表达的检测从而构建NK细胞增敏化合物的筛选方法；通过对大量小分子化合物进行筛选，以期获得具有促进NKG2D配体表达的活性化合物。筛选结果显示，化合物S1973, S2282，S2306和S3019能够显著上调人肝癌HepG2细胞表面MICA/B的表达水平，其中，化合物S3019（环吡酮胺，Ciclopirox Olamine, CPX）活性最显著。CPX是一个临床抗真菌药物，近年的研究发现CPX具有较好的抗肿瘤活性，目前CPX已进入I期临床研究，用于血液恶性肿瘤的治疗。我们的研究发现，CPX对HepG2细胞表面的NKG2D配体（MICA/B, ULBP1, ULBP2, ULBP3）表达均有明显的促进作用；另外，在多株不同的肿瘤细胞中，CPX也能够显著促进NKG2D配体的表达。体外NK细胞介导的细胞毒实验结果显示，CPX能够通过上调肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达从而增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。通过对NKG2D配体mRNA水平进行检测，我们发现CPX能够上调肿瘤细胞中MICA和MICB的mRNA水平，表明CPX能够从转录水平调控肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达。肿瘤细胞中活性氧的水平以及活性氧介导的下游信号通路的磷酸化，包括ERK和AKT，是影响肿瘤细胞表面NKG2D配体表达的重要因素。我们的研究显示CPX能够增加肿瘤细胞中活性氧的水平，并且显著增加AKT蛋白的磷酸化水平，然而，活性氧以及AKT磷酸化水平的升高是否参与CPX的免疫增敏作用有待进一步研究。综上所述，我们建立了NK细胞增敏化合物的筛选方法，并利用该方法首次发现CPX具有肿瘤免疫增敏功能，CPX能够通过促进肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达从而增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，以上研究从免疫调节的角度进一步揭示了CPX的抗肿瘤作用机制，并为CPX将来在NK细胞介导的肿瘤免疫治疗中的可能应用提供了重要的药理学依据。
	2019-06
学位授予单位	中国科学院昆明植物研究所
学位名称	硕士
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.kib.ac.cn/handle/151853/74048
专题	昆明植物所硕博研究生毕业学位论文
推荐引用方式 GB/T 7714	赵章寻. 环吡酮胺增强免疫细胞杀伤肿瘤的活性评价[D]. 中国科学院昆明植物研究所,2019.

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2016E8010663064-赵章寻-（2668KB）	学位论文		限制开放	CC BY-NC-ND	请求全文