蔓菁游离小孢子培养体系建立及双单倍体（DH）群体形态多样性分析

	蔓菁游离小孢子培养体系建立及双单倍体（DH）群体形态多样性分析; Establishing isolated microspore culture of Turnip (Brassica rapa var. rapa）for production and phenotype analysis of doubled haploid (DH) plants
	柯筱纯
导师	杨永平
学位专业	生物工程
关键词	蔓菁小孢子培养胚状体 DH群体
摘要	蔓菁（Brassica rapa var. rapa）属十字花科芸薹属草本植物，膨大的肉质根具有很高的营养价值和经济价值，是青藏高原食、饲、药三用的传统种植作物。目前，我们所收集到的蔓菁品种在形态上存在明显的差异，即使是同一地方的品种也出现一定程度的分离，说明蔓菁具有高度杂合的遗传背景。蔓菁复杂的遗传背景不利于我们开展下一步地基因功能研究。为了纯化蔓菁的遗传背景我们构建了蔓菁游离小孢子培养体系，并通过对花蕾长度与小孢子发育时期、基因型、培养基、低温预处理、热激处理、活性炭和琼脂糖以及植物生长激素等培养条件的研究对蔓菁游离小孢子培养体系进行优化。首先为了便于取材，我们确定了花蕾长度与小孢子的发育时期的对应关系，当花蕾长度为2.00-2.49mm时，小孢子主要处于单核靠边期，所占比例为73.5％-77.7％，是诱导小孢子胚形成的最佳时期。其次，通过对56个不同基因型的蔓菁出胚情况进行了筛选，发现有14个品种可以成功诱导出小孢子胚。最后，我们选择了5个品种，通过改变培养基、低温预处理时间、热激处理时间、活性炭和琼脂糖配比以及植物激素配比等条件进行了优化，发现最佳培养基为NLN-13培养基，最佳低温（4℃）预处理时间为24h，最佳热激（33℃）处理时间为24h，而不同基因型所需的NAA和6-BA的配比浓度不同，KTRG-B-10最适浓度为：NAA0.05mg/L+6-BA0.2mg/L，KTRG-B-15与KTRG-B-102最适浓度为：NAA0.1mg/L+6-BA0.2mg/L，KTRG-B-29与KTRG-B-64最适浓度为：NAA 0.05mg/L+6-BA 0.05mg/L。我们通过游离小孢子培养技术成功构建了小孢子群体，利用流式细胞仪对小孢子植株进行了倍性鉴定，发现二倍体植株和单倍体植株的产生是随机的。我们对蔓菁B10、B15、B29双单倍体（DH）群体进行了表型分析，获得了表型差异显著的小孢子植株，为研究蔓菁基因功能、遗传进化和生态适应提供了遗传学材料。
	2019-06
学位授予单位	中国科学院昆明植物研究所
学位名称	硕士
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.kib.ac.cn/handle/151853/74010
专题	昆明植物所硕博研究生毕业学位论文
推荐引用方式 GB/T 7714	柯筱纯. 蔓菁游离小孢子培养体系建立及双单倍体（DH）群体形态多样性分析, Establishing isolated microspore culture of Turnip (Brassica rapa var. rapa）for production and phenotype analysis of doubled haploid (DH) plants[D]. 中国科学院昆明植物研究所,2019.

条目包含的文件
文件名称/大小	文献类型	版本类型	开放类型	使用许可
蔓菁游离.docx（1528KB）	学位论文		限制开放	CC BY-NC-ND	请求全文