细圆藤、球果藤、连蕊藤和构树的化学成分与抗HBV活性研究

	细圆藤、球果藤、连蕊藤和构树的化学成分与抗HBV活性研究
其他题名	CHEMICAL CONSTITUENTS AND THEIR ANTI-HBV ACTIVITIES OF THREE MENISPERMACEOUS PLANTS AND BROUSSONETIA PAPYRIFERA
	闫孟红
导师	陈纪军
学位专业	植物学
关键词	细圆藤球果藤连蕊藤构树化学成分莲花烷型生物碱抗hbv活性抗hiv-1活性抗hsv-1活性抗口腔微生物活性
摘要	本论文对四种药用植物的化学成分及其抗病毒（HBV、HIV-1、HSV-1）活性和抗口腔微生物活性进行了研究。前三章阐述了三种防己科植物细圆藤[Pericampylus glaucus (Lam.) Merr.]、球果藤(Aspidocarya uvifera Hook. f. et Thoms.) 和连蕊藤[Parabaena sagittata (Wall.) Miers ex Hook. f. et Thoms.]的化学成分及抗病毒（HBV、HIV-1、HSV-1）活性的研究结果。从这三种植物中共分离得到29个化合物，其中化合物1、4、5、6、12和13具有抑制乙肝病毒表面抗原分泌的活性，尤其是化合物6对乙肝病毒表面抗原的分泌具有较强的抑制作用，其IC50 = 0.14 mM，选择性指数SI > 22.40；在体外抗HIV-1活性筛选中化合物1、3、5、6和28也显示出较好的抑制HIV-1病毒的活性，化合物5的EC50和CC50的值分别为10.90 µM和493 µM，其选择性指数SI为45.74；化合物6的EC50和CC50的值分别为14.10 µM和307 µM，其选择性指数SI为18.80；化合物28的EC50和CC50的值分别为15.88 µM和261.0 µM，其选择性指数SI为16.91。第四章研究了构树 [Broussonetia papyrifera (L.) Vent.] 的化学成分及抗HBV活性和抗口腔微生物活性。从构树中共分离得到36个化合物，其中化合物51对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）的分泌均有较好的抑制作用，其IC50分别为0.17和0.15mM，选择性指数SI分别为2.90和3.35。化合物47、49和54对HBsAg的分泌具一定抑制作用（选择性指数 SI =1.78、SI >1.43、SI = 1.22）。抗口腔微生物实验共选用了8株细菌作为受试菌株，包括粘性放线菌（Actinomyces viscosus，ATCC 27044）、变形链球菌（Streptococcus mutans，ATCC 25175）、内氏放线菌（Actinomyces naeslundii ATCC 12104）、牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，ATCC 33277）、核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum，ATCC 10953）、嗜血放线伴生杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，ATCC 43717）、血链球菌（Streptococcus sanguinis，ATCC 10556）和远缘链球菌（Streptococcus sorbrinus，ATCC 6715）。实验结果显示，构树95%的乙醇提取物具有较好的抑菌作用，对其中4种口腔细菌均有抑制作用。萃取得到的乙酸乙酯部分对变形链球菌（S. mutans）和牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）显示了较好的抑菌作用。分离自乙酸乙酯部分的量较大的化合物也进行抑菌试验。其中化合物37、32、54、65、34、46和30对口腔细菌具有较好的抑制作用。第五章综述了国内外学者对构树属植物的化学成分和生物活性研究概况。第一章细圆藤化学成分及抗HBV、HSV-1和HIV-1活性细圆藤[Pericampylus glaucus (Lam.) Merr.]为防己科细圆藤属植物，具有祛风镇静，清热解毒，散瘀止痛等功效。从细圆藤中共分离鉴定了11个化合物，结构分别为：细圆藤碱A–D（periglaucines A –D，1–4）、norruffscine (5)、(–) - 8 - 氧四氢巴马亭 [(–) - 8 - oxotetrahydropalmatine，6]、(–) - 8 - 氧坎那定 [(–) - 8 - oxocanadine，7]、(–) - 异月桂碱 [(–) - isolaureline，8]、β - 谷甾醇（β - sitosterol，9）、胡萝卜苷（daucosterol，10）和5(E) - N - (2′ - R - 羟基 - 三十六烷酰基) - 3, 4 - 异亚丙基 - 5, 6 - 二烯 - 十八鞘氨醇 [5(E) - N - (2′ - R - hydroxy - trihexadecyl - 3, 4 - O - isopropylidene - 5, 6 - en - octadecasphingenine)，11]。其中化合物1–4为新化合物。这是首次从细圆藤中分离得到莲花烷型生物碱并对其抗HBV病毒、抗HSV-1病毒和抗HIV-1病毒的活性进行了初步的研究。结果表明，细圆藤碱A (1)和D (4) 对HBV病毒表面抗原的分泌具有一定的抑制作用，其IC50 分别为1.04和0.67 mM，选择性指数SI 分别为2.85和3.07。细圆藤碱A (1)和C (3) 对HIV-1病毒具有一定的抑制作用，其EC50 分别为204和162.5 µM，选择性指数SI 分别为4.03和3.29。除此之外，已知化合物5–7也进行抗病毒活性筛选。结果显示，化合物5和6具有抑制HBsAg分泌的活性，尤其是化合物6对HBsAg的分泌具有较强的抑制作用，其IC50 = 0.14 mM，选择性指数SI > 22.40。抗HSV-1活性筛选结果表明，化合物5具有较好的抗HSV-1病毒潜力，最小抑制浓度为4.00 µg/mL。化合物5和6在抗HIV-1活性筛选中对HIV-1病毒也显示了一定的抑制作用，其EC50分别为10.90 µM和14.10 µM，CC50的值分别为和493 µM和307 µM，选择性指数SI为45.74和18.80。第二章球果藤化学成分及抗HBV活性研究球果藤(Aspidocarya uvifera Hook. f. et Thoms.)为防己科球果藤属植物，有调理气血、通淋利水的功能，用于风湿疼痛、劳伤疼痛、水肿等症。该植物乙醇提取物的抗HBV活性筛选显示乙醇提取物具有较好的活性，说明该植物乙醇提取物有抗HBV活性成分存在。通过对球果藤的化学成分研究，利用各种柱层析方法共分离得到20个化合物，利用波谱分析（UV，IR，EIMS，1H和 13C NMR）方法分别鉴定为：球果藤碱A–G (aspiduviferines A–G，12–18)、N - O - dimethyloxostephine (19)、longanone (20)、prostephanaberrine (21)、acutumine (22)、3 - O - 乙酰齐墩果酸 (3 - O - acetyloleanolic acid，23)、polyporusterone A (24)、3 - (6, 8, 10 - (E, E, E) - 十七烷三烯酰) - 丙三醇 [3 - (6, 8, 10 - (E, E, E) - heptadecantrienoyl) - glycerol，25)、细圆藤碱A–D (periglaucines A–D，1–4)、β - 谷甾醇（β - sitosterol，9）和胡萝卜苷（daucosterol，10）。其中化合物12–18为新化合物。所有化合物均为首次从该植物中分离得到。这是首次从球果藤中分得莲花烷型生物碱，并对量较多的化合物进行了抗HBV活性研究，结果表明球果藤碱A (12)和B (13)具有一定的抑制HBsAg分泌的活性，其IC50 分别为1.01和0.73 mM，选择性指数SI分别为 2.040和2.840。第三章连蕊藤化学成分及抗HBV和HIV-1活性研究连蕊藤[Parabaena sagittata (Wall.) Miers ex Hook. f. et Thoms.]为防己科连蕊藤属植物，其叶具有通便的作用。通过对连蕊藤化学成分的研究，从连蕊藤中共分离得到7个化合物，结构分别为：promucosine (26)、巴马亭（palmatine，27）、穆坪马兜铃酰胺（N - trans - feruloyl tyramine，28）、(22S) - 5α - 麦角甾烷 - 3α, 22 - 二醇 [ (22S) - 5α - ergostane - 3α, 22 - diol，29]、(–) - 8 - 氧四氢巴马亭 [ (–) - 8 - oxotetrahydropalmatine，6]、β - 谷甾醇（β - sitosterol，9）和胡萝卜苷（daucosterol，10）。所有化合物均为首次从该植物中分离得到。对所分离到的部分化合物进行了抗HBV病毒和抗HIV-1病毒活性筛选。研究结果显示，化合物6具有抑制HBsAg分泌的活性，其IC50 = 0.14 mM，其选择性指数SI > 22.40。体外抗HIV-1活性筛选表明，化合物28具有抗HIV-1病毒活性，其EC50和CC50的值分别为15.88 µM和261.0 µM，选择性指数SI为16.91。化合物6在体外活性筛选中对HIV-1病毒也显示了一定的抑制作用，其EC50和CC50的值分别为14.10 µM和307 µM，其选择性指数SI为18.80。第四章构树化学成分及抗HBV和抗口腔微生物活性研究构树[Broussonetia papyrifera (L.) Vent.]为桑科构树属植物，有补肾利尿、清肝明目、健胃、消炎、凉血止血之功效。利用各种柱层析，从构树根皮乙醇提取物的乙酸乙酯部分分离得到36个化合物，经波谱方法分别鉴定为：broussoflavan B (30) 、broussoflavan C (31)、7, 4′- 二羟基 - 3 - 异戊烯基黄烷 (7, 4′ - dihydroxy - 3 - prenylflavan，32)、7, 3′ - 二羟基 - 4 - 甲氧基黄烷 (7, 3′ - dihydroxy - 4 - methoxyflavan，33)、3' - (3 - methylbut - 2 - enyl) - 3', 4' , 7 - trihydroxyflavane (34)、2- (S) - 7, 3, 5 -三羟基黄烷 [2 - (S) - 7, 3 ,5 - trihydroxyflavane，35]、4′, 7 - 二羟基黄烷 (4′, 7 - dihydroxyflavan，36)、小构树醇B (kazinol B，37)、(–) - broussoflavan A (38)、(±) - broussoflavan A (39)、小构树醇A (kazinol A，40)、4', 7 - 二羟基 - 3 - 羟基黄烷醇 (4', 7 - dihydroxyflavan - 3 - ol，41)、3′, 4′, 7 - 三羟基 - 3 - 羟基黄烷 (3′, 4′, 7 - trihydroxyflavan - 3 - ol，42)、山奈酚（kaempferol，43）、broussoflavonol B (44)、8 - (1, 1 - dimethylallyl) - 5′ - (3 - methylbut - 2 - enyl) - 3′, 4′, 5, 7 - tetrahydroxy - flanvonol (45)、乌拉尔醇 - 3 - 甲醚 (uralenol - 3 - methylether，46)、3′ - 羟基 - 7, 4′ - 二甲氧基二氢黄酮 (3′ - hydroxy - 7, 4′ - dimethoxyflavanone，47)、3, 5, 7, 3′, 4′ - 五羟基 - 5′ - 异戊烯基黄酮 (3, 5, 7, 3′, 4′ - pentahydroxy - 5′ - isoprenylflavone，48)、乌拉尔素 (5, 6, 3′, 4′ - tetrahydroxy - 3 - methoxy - 6′ - isoprenyl flavone，49)、3′, 4′, 7 - 三羟基 - 5′ - 异戊烯基二氢黄酮 (3′, 4′ , 7 - trihydroxy - 5′ - isoprenylflavanone，50)、3, 3′, 5, 5′, 7-五羟基二氢黄酮 (3, 3′, 5, 5′, 7- pentahydroflavanone，51)、butein (3, 4, 2′, 4′ - tetrahydroxychalcone，52)、异甘草素 (isoliquiritigenin，53)、broussochalcone A (54)、broussonina A (55)、齐墩果酸 (oleanolic acid，56)、augustic acid (57)、balanophonin (58)、松柏醛 (coniferyl aldehyde，59)、3 - (4′ - hydroxy - 3′ - methoxy - phenyl) propane - 1, 2 - diol (60)、broussonol E (61)、1 - (2′ - hydroxy - 4′ - methoxyphenyl) - 3 - (3", 4" - dihydroxyphenyl) - propane (62)、corylifol (63)、朝藿素B (epimedokoreanin B，64)、5, 7, 3′, 4′ - 四羟基 - 3 - 甲氧基 - 5′, 8 - 二异戊烯基黄酮 (5, 7, 3′, 4′ - tetrahydroxy - 3 - methoxy - 5′, 8 - diisoprenylflavone，65) 。其中化合物31和32为新化合物。构树95%乙醇提取物及萃取物首先进行了抗HBV活性筛选，结果表明，构树95%的乙醇提取物对HBsAg分泌和HBeAg的分泌均有较好抑制作用，选择性指数SI 分别为2.10和2.13。正丁醇萃取部分和水部分对HBsAg的分泌具有一定的抑制作用，选择性指数SI 分别为1.37和1.55。除此之外，分离自乙酸乙酯部分的量较大的化合物也进行了抗乙肝病毒活性筛选，结果显示，化合物51对HBsAg和HBeAg的分泌都有较好的抑制作用，其IC50为0.17 和0.15 mM，选择性指数SI 分别为2.90和3.35。化合物47、49和54对HBsAg的分泌具一定抑制作用，其选择性指数SI 分别为1.78、大于1.43和1.22。其余所测化合物均未显示明显的活性。构树乙醇提取物和不同的萃取部位也进行了抗口腔微生物活性筛选。粗筛选用了4种口腔细菌，包括粘性放线菌（Actinomyces viscosus）、变形链球菌（Streptococcus mutans）、牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）和核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum）作为受试菌株。结果显示，构树95%的乙醇提取物具有较好的抑菌作用，对这4种口腔细菌均有不同程度地抑制作用。萃取得到石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分四部分中乙酸乙酯部分对变形链球菌（S. mutans）和牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）显示了较好的抑制作用。从构树乙酸乙酯部分分离得到的量较大的化合物也进行抑菌试验。除了以上4种口腔细菌外，实验还选用了内氏放线菌（Actinomyces naeslundii）、嗜血放线伴生杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans）、血链球菌（Streptococcus sanguinis）和远缘链球菌（Streptococcus sorbrinus）作为受试菌株。结果表明，化合物37、32、54、65和34对变形链球菌（S. mutans）、内氏放线菌（A. naeslundii）、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）和核梭杆菌（F. nucleatum）4种口腔微生物均具有较好的抑制作用；其中化合物54对口腔微生物内氏放线菌（A. naeslundii）、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）和核梭杆菌（F. nucleatum）的抑制作用优于阳性对照；化合物37、32、54和65对内氏放线菌（A. naeslundii）的抑制活性优于阳性对照。化合物46对粘性放线菌（A. viscosus）、内氏放线菌（A. naeslundii）、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）和核梭杆菌（F. nucleatum）4种微生物具有抑制作用；化合物30对粘性放线菌（A. viscosus）、内氏放线菌（A. naeslundii）、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）、核梭杆菌（F. nucleatum）、血链球菌（S. sanguinis）和远缘链球菌（S. sorbrinus）6种微生物具有较好的抑制作用。因此，化合物37、32、54、65、34、46和30均具有开发应用的潜力，其作用机理需要进一步深入研究。第五章构树属植物化学成分及生物活性研究进展通过查阅文献报道，结合我们研究组对构树乙醇提取物化学成分的研究，发现该属植物主要包括黄酮、苯丙烷、生物碱、脂肪酸、氨基酸和矿物质等化学成分，其中黄酮和吡咯烷型生物碱为主要的活性成分。构树属植物主要的生物活性包括抗氧化活性、细胞毒性、抑制糖苷酶活性、抑制酪氨酸酶活性、抑制血小板凝集活性、抑制微生物生长等活性。为了更合理有效地利用该属的植物资源，本文从化学成分、生物活性及生理药理作用等方面对构树属植物进行了综述。
语种	中文
	2008-05-28
学位授予单位	中国科学院昆明植物研究所
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.kib.ac.cn/handle/151853/166
专题	昆明植物所硕博研究生毕业学位论文
推荐引用方式 GB/T 7714	闫孟红. 细圆藤、球果藤、连蕊藤和构树的化学成分与抗HBV活性研究[D]. 昆明植物研究所. 中国科学院昆明植物研究所,2008.

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